到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標(biāo)準(zhǔn)的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1.小鼠模型感染后臨床癥狀變化

小鼠感染H9N2病毒后的存活情況如圖1A所示，其中接種野生病毒株的小鼠14天內(nèi)全部存活，而接種鼠肺適應(yīng)株的小鼠5天內(nèi)全部死亡。小鼠感染106 EID50鼠肺適應(yīng)株后，第1天開始出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象，體重下降明顯，迅速死亡，而接種野生病毒株的小鼠，體重處于持續(xù)增長的狀態(tài)（圖1B）。

(A) 小鼠分別感染PBS、WT或鼠肺適應(yīng)株病毒后的存活率。

(B) 小鼠分別感染PBS、WT或鼠肺適應(yīng)株病毒后的體重下降情況。

2.小鼠模型感染后病毒在組織中復(fù)制情況

接種106 EID50病毒的小鼠在感染后3，5天各安樂解剖3只，來分析病毒的組織分布。感染后第3天各組小鼠的肺組織中均可檢測到排毒，但鼠肺適應(yīng)株組明顯高于野生組，存在顯著性差異（圖2）。雞胚滴度測定結(jié)果可見P12-1，p12-2，P12-3代病毒感染的小鼠肺組織病毒滴度顯著高于P0代感染的小鼠（P<0.01），并且在小鼠的肝、腎、腦、腸等組織中檢測到病。

3. 小鼠模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

感染后第14天，對存活小鼠的眼眶靜脈叢血清進(jìn)行血凝抑制實驗（HI），測定對H9N2病毒的特異性抗體效價，結(jié)果證實所有存活小鼠（僅WT組）均出現(xiàn)抗血清轉(zhuǎn)陽，對WT病毒的HI效價達(dá)320-1280。而對鼠肺適應(yīng)株的HI效價只有20-160。

小鼠是用于評估流感感染最常用的哺乳動物模型。小鼠的品種和品系很多，是實驗室動物中培育品系最多的動物，其遺傳學(xué)背景也研究的比較詳盡。優(yōu)點是價格相對低廉，遺傳譜系清晰，品系純正，供給充足；當(dāng)然也有著多方面的缺點，主要表現(xiàn)在：首先小鼠不是流感的天然宿主還缺少人流感病毒的臨床癥狀；多數(shù)毒株感染后表現(xiàn)為體溫過低而非發(fā)熱；不能傳播病毒。

實驗用小鼠在其呼吸道上通常表達(dá)SAα2,3Gal和SAα2,6Gal兩種唾液酸受體，因此對人流感病毒、禽流感病毒都較為易感。但人A型流感病毒（H1、H2、H3）一般要經(jīng)過在小鼠上適應(yīng)性傳代才能有效復(fù)制，而一些低致病性和高致病性禽流感如H5N1、H2、H6和H7病毒則不需要適應(yīng)傳代即可感染。特別是對于H5和H7等高致病性禽流感病毒感染不僅僅局限于小鼠的呼吸組織，還包括腦、脾臟、胸腺、腎、肝臟和心臟等器官。小鼠全身性的病毒感染主要是因為各個臟器中都存在裂解HA蛋白的水解酶，小鼠除了出現(xiàn)呼吸癥狀外還會表現(xiàn)出后肢麻痹等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。但也有例外，當(dāng)用高劑量的并無多個堿性裂解位點的A/WSN/1933（H1N1）毒株滴鼻感染小鼠，小鼠腦組織也會感染病毒并出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。所以僅有受體分布并不能完全決定流感病毒的宿主范圍。

制作流感病毒感染動物模型多應(yīng)用SPF級雌性BALB/c小鼠，4-6周齡。

將分離得到的H9N2病毒毒株（A/brambling/Beijing/16/2012，Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)在小鼠體內(nèi)進(jìn)行連續(xù)傳代，純化病毒，得到3個鼠肺適應(yīng)株，命名為：P12-1、 P12-2、 P12-3。使用4-6周齡SPF級雌性BALB/c小鼠，麻醉后滴鼻感染，小鼠感染后觀察14天，監(jiān)測存活率及體重變化率。感染后分時間段安樂死小鼠，收集小鼠肺、脾、腦、心、腎等組織，進(jìn)行病毒滴度測定。

流感病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病原體，它能導(dǎo)致流感疫情甚至世界大流行，流感在各個年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。流感病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒，屬于正黏液病毒科，呈球形或絲狀，直徑80-120nm。病毒外層為兩種不同糖蛋白構(gòu)成的輻射狀突起，即血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。根據(jù)HA和NA抗原的不同，又可分為許多亞型，H可分為16個亞型，N有9個亞型(N1～N9)。在所有的流感亞型中，H9N2備受關(guān)注，H9N2分布區(qū)域廣泛，偶爾還可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、H10N8亞型禽流感的6個內(nèi)部基因均來自H9N2亞型病毒。文獻(xiàn)報道H9N2亞型不經(jīng)過適應(yīng)即可在小鼠體內(nèi)進(jìn)行有效復(fù)制。另外，有文獻(xiàn)報道，H9N2病毒在獲得2009年甲型H1N1病毒內(nèi)部基因后即可在雪貂群體間通過氣溶膠傳播。

一般感染H9N2的潛伏期為2～4d,平均3d。臨床急性起病，早期表現(xiàn)類似一般流感,主要為發(fā)熱，體溫大多持續(xù)在39℃以上，熱程1～7d，一般為3～4d,可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛和周身不適，少數(shù)患者有惡心、腹痛、腹瀉、稀水樣便等癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，可出現(xiàn)肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細(xì)胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征等多種并發(fā)癥。感染H9N2預(yù)后良好。