培育基的滅菌及運用

1.每次配置時，要留意其消費日期能否在保質(zhì)期內(nèi)，檢查其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未蛻變，并且未吸潮。 2.培育基配置時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。 3.一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好培育基不能長時間放置，更不可隔夜。 4.滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效滅菌時間。 5.滅菌過的培育基要冰箱保管，可保管一周，普通不超越 3 天。而且要遵照“先入先出”準繩，先配制的要先運用。 6.在運用時，要依據(jù)當班次的運用量，用水浴鍋先將培育基溶化為液態(tài)，然后及時調(diào)低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培育基處于高溫形狀。 7.做產(chǎn)品微生物檢測時，傾倒培育基溫度在 45℃左右，不可過燙，防止將菌燙死；也不可過涼，化好的培育基又結(jié)塊凝結(jié)，方便于觀察結(jié)果。 8.每瓶培育基均要做空白。 9.盡量集中做樣，防止頻繁翻開同一瓶培育基瓶塞，增大培育基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。 10.培育基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。 做樣環(huán)境的維持

一、大環(huán)境（房間） 1.做樣時，窗戶和空調(diào)要封鎖，或用酒精對房間停止噴霧消毒，防止房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺外部環(huán)境（*好在有通排風系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間停止操作）。 2.假設在原來的原料微生物檢測室停止做樣，要活期開啟紫外燈，對房間停止殺菌。 二、小環(huán)境（超凈臺） 1.活期清潔初效過濾器，要及時改換。 2.做樣前，將超凈臺外部停止清潔，用 75%酒精停止擦拭消毒，并提早半小時將超凈臺紫外燈翻開，對超凈臺外部環(huán)境停止殺菌。 3.關紫外燈，開風機，調(diào)整適宜進風量，風量不可過低。 4.每次做樣后，要對超凈臺外部停止清算、清潔，并用 75%酒精停止擦拭消毒。 5.紫外燈依據(jù)其運用壽命要及時改換。 6.做樣同時，要做上相應菌落檢測的環(huán)境空白。 7.做樣區(qū)域的選擇： ①普通在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區(qū)域停止無菌操作； ②要在酒精燈火焰的外焰維護區(qū)域停止操作。 工用具的潔凈度

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式停止滅菌。

2.做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣公用，不可與其它操作用具混用，運用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式停止滅菌。

3.接種針（環(huán)）采用灼燒方式停止滅菌，但要留意做樣時要先將接種針（環(huán)）停止冷卻。 樣品的采集及檢測 一、保證采樣用具的無菌性 1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式停止滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，招致玻璃器皿易裂紋而報廢）。 2.取樣筐：運用前要用 75%酒精停止噴灑消毒 3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精停止擦拭消毒。 4.取樣袋：可現(xiàn)用酒精停止擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包卸車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。 5.電子稱外表用 75%酒精消毒。 二、人員操作 1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。 2.取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。 3.取樣終了，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面停止紫外燈照射消毒。 4.在要求的做樣區(qū)域停止操作。 5.做樣前，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓客Ｖ共潦孟?，再啟齒。 6.往鹽水瓶加樣品時，要留意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。 7.樣品計量要準確，稀釋倍數(shù)也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），停止 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要防止將管底部捅破。 8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將局部微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。 9.停止稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。 10.傾倒平皿時，要留意培育基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培育基要過量，不可以太少，在培育進程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。 11.做大腸菌群樣時，要提早將乳糖膽鹽培育基培育管按需求量備好，放入超凈臺對外表面停止紫外線滅菌。 12.接二步時，要留意先將接種針（環(huán)）停止冷卻，防止出現(xiàn)接不上菌落的狀況發(fā)作，招致無法判別、確認。 13.做樣終了，及時放入相應培育箱停止培育，并清算清潔超凈臺。

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微生物檢測是運用微生物學的實際與方法，檢驗產(chǎn)品中微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)及其對人的安康的影響，以判別能否契合質(zhì)量規(guī)范的檢測方法。

檢測范圍：

醫(yī)藥微生物：藥品原料、藥品、中藥材、保健品等

水質(zhì)微生物：純真水、生活飲用、自然凈水、自然礦泉水、瓶桶裝飲用水及工業(yè)用水等

食品微生物：肉制品、蛋制品、糧食制品、水產(chǎn)制品、乳制品、飲料等

日用產(chǎn)品：化妝品、清潔護理用品、洗濯用品、一次性衛(wèi)生用品、一次性醫(yī)療用品等

土壤微生物檢測：種植土、農(nóng)業(yè)用地等

環(huán)境微生物：特定環(huán)境中微生物限制檢測等

檢測項目：

菌落總數(shù)、霉菌和酵母計數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特氏菌、雙歧桿菌、乳酸菌、罐頭商業(yè)無菌、阪崎腸桿菌、糞鏈球菌等其他指定微生物

檢測規(guī)范：

GB/T 38483-2020 微生物源抗生素類次生代謝產(chǎn)物抗細菌活性測定 抑菌圈法

GB/T 38481-2020 微生物超低頻突變測定 雙重測序法

GB/T 38480-2020 微生物源抗生素類次生代謝產(chǎn)物抗真菌活性測定 菌絲生長速率法

GB/T 38568-2020 工業(yè)微生物菌株生長表型測定 微液滴濁度法

GB/T 38569-2020 工業(yè)微生物菌株質(zhì)量評價 拉曼光譜法

GB/T 38580-2020 微生物誘變育種技術(shù)規(guī)范

GB/T 38096-2019 微生物源抗生素類次生代謝產(chǎn)物殺線蟲活性測定 浸蟲法

GB/T 37280-2019 熒光增白劑產(chǎn)品中微生物的測定

GB/T 19973.2-2018 醫(yī)療器械的滅菌 微生物學方法 第2局部：用于滅菌進程的定義、確認和維護的無菌實驗

GB/T 34224-2017 生物產(chǎn)品中功用性微生物檢測

GB/T 33682-2017 基質(zhì)輔佐激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則

GB/T 32720-2016 土壤微生物呼吸的實驗室測定方法