本模型不涉及除遺傳物質重組對環(huán)境生態(tài)影響以外的其它安全性問題，本模型小鼠的保存、使用和處理均按照研究所倫理和安全委員會的要求執(zhí)行，可以確保不產生安全性問題。

1、基因鑒定信息

2 、免疫熒光染色

敲除腸上皮STAT5基因導致腸道干細胞減少

Western結果顯示STAT5基因敲除導致腸道干細胞減少

通過FACS分析敲除STAT5基因后干細胞數目明顯減少，細胞增殖減少，模型建立成功。

實驗動物：Stat5 flox小鼠，Villin-CreERT2小鼠

試劑：tamoxifen(50mg/kg)，4%PFA

儀器：冰凍切片機，leica DMI8活細胞項目合作單位

實驗操作規(guī)程：將Stat5 flox小鼠與Villin-CreERT2小鼠雜交，在小鼠4周齡時，提取雜交小鼠鼠尾DNA，通過凝膠電泳檢測小鼠基因型。STAT5基因PCR引物序列如下1. GAA AGC ATG AAA GGG TTG GAG 2.AGC AGC AAC CAG AGG ACT AC 3.AAG TTA TCT CGA GTT AGT CAG G,Villin-CreERT2基因PCR引物序列如下:1 GTG TGG GAC AGA CAA ACC 2.ACATCT TCA GGT TCT GCG GG。選取雙陽性小鼠，6~8周齡，體重20~22g。按每只小鼠連續(xù)5天按50mg/ kg腹腔注射他莫西芬。誘導后CO2麻醉處死小鼠，取腸道組織，用冷PBS沖洗腸道組織，置于4%多聚甲醛中固定過夜，1×PBS溶液里浸泡5min。制作冰凍切片及石蠟切片，免疫組化及免疫熒光染色觀察腸道干細胞的變化。

1. STAT基因（細胞/基因/病原/其他造模因素）信息

STAT(信號轉換器和轉錄激活因子)轉錄因子家族由STAT 1、3、4和5幾種蛋白質組成。Janus激酶(JAK)/STAT信號通路與多種癌癥如卵巢癌、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤和結腸癌相關。配體結合啟動激活級聯(lián)反應，最終導致STAT蛋白的磷酸化。磷酸化使STATs從細胞質轉移到細胞核并具有轉錄活性。STAT蛋白的關鍵激活因子是干擾素、白細胞介素等細胞因子，以及轉化生長因子(TGF) b等生長因子或癌基因等。

Stat5是信號轉導和轉錄活化蛋白家族的重要成員，參與了Jak/Stat信號通路調控。Stat5能夠影響細胞的增值/分化、存活與凋亡，并且在乳腺癌發(fā)育、免疫應答干細胞自我更新調控、造血作用以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

2. 研究背景

在哺乳動物體內，小腸組織是自我更新速度最快的組織之一。整個小腸黏膜大概每3~5d更新一次，主要依賴于小腸干細胞的增殖與分化。研究證實Ascl2、Olfm4、Bmi-1、Hopx等為小腸干細胞的標志基因。在這些標記基因中，Lgr5被認為是最重要的。從功能上分析，Lgr5編碼G蛋白偶聯(lián)受體，在Wnt信號通路中起著重要的作用。從數量上看，Lgr5+干細胞增殖活躍，具有自我更新的潛能，在所有隱窩的底部均大量存在，以維持小腸上皮的穩(wěn)態(tài)。細胞因子- stat5信號通路調控可以調控腸上皮的穩(wěn)態(tài)和損傷反應。我們通過特異性敲除腸道上皮細胞中的STAT5轉錄因子將STAT5信號通路與IESC的增殖分化聯(lián)系起來。